编者按：2023年4月23~26日，第49届欧洲骨髓移植年会(EBMT2023)于法国巴黎隆重召开，各国专家学者们群英荟萃，带来了精彩纷呈的最新研究进展。在血液检验领域，今年恰逢流式细胞术问世五十周年，经过半个世纪的快速发展，该项技术已经成为血液肿瘤诊断和随访过程中不可或缺的工具。急性髓系白血病（AML）是成人中发病率最高的急性白血病，微小残留病变（MRD）检测对于临床治疗和预后评价至关重要又存在很多技术难点。随着2018年和2021年欧洲白血病网络（ELN）两次重磅专家共识的推出，针对多参数流式细胞术（MFC）检测AML MRD的技术问题也进行了讨论，该项研究再次成为血液检验领域的焦点。在EBMT2023会议上，河北燕达陆道培医院、北京陆道培医院王卉教授团队一项真实世界研究(大会摘要号：P765)入选壁报交流环节，研究介绍了陆道培医院一项多年来的研究成果——高效实用的MFC检测AML MRD的方案。《肿瘤瞭望》特邀王卉教授对该研究进行了深入解读和分析，现整理如下。

 

 

ELN关于AML MRD的专家共识是全球血液肿瘤领域最具权威性的共识，2018年的版本引起了强烈反响，在2021年升级版中，首次针对MFC检测MRD做出了具体要求。对于AML MRD检测，陆道培医院使用与ELN共识相似的方案，并进行了一定的改进。本研究比较了不同方案的覆盖率及灵敏度。

 

 

2022年8月10日至9月15日，在河北燕达陆道培医院流式细胞室进行AML（除APL、M6、M7外的其他亚型AML）MRD检测的骨髓标本302例，选择原始细胞比例0.1%以上且获取有效细胞数50万以上的标本进行后续研究，共入选220例，男性113例，女性107例，中位年龄32岁（1-73岁），7.92%（0.1-96.78%）。检测方案：2管并行方案，见表1。

 

表1.陆道培医院的MFC检测AML MRD方案

 

入组方案1的患者100例（45.45%），入组方案2的患者120例（54.55%）。另外，每个方案选择20例非AML的完全缓解骨髓标本做正常对照。流式细胞仪型号为美国BD公司3激光8-12色的canto或者lyric。标本处理采用标记、孵育、溶红细胞、洗涤方法。软件分析使用diva 8.02，kaluza以及flowjo软件。设门分析：按照实验室常规设置去粘连细胞门和活细胞门，从单个活细胞开始进行同步设门：如果CD45/SSC图有明显原始细胞群，设置原始细胞门；如果原始细胞比例低，分别使用CD34/SSC、CD117/SSC、CD45dim/HLA-DR/SSChi/CD11b-设置原始、幼稚细胞门。髓系原始细胞的定义：正常标本以CD34+/CD117+细胞为准，若肿瘤细胞不表达CD34，以CD117+细胞为准，如果CD34、CD117均不表达，以CD45dim/HLA-DR+/SSChi/CD11b-细胞为准。MRD结果分析分别由本室2名工作时间5年和10年以上各一名医生进行双盲判断，并经MICM结果确定。

 

 

1、将MRD阳性（n=105）数据用ELN设门策略进行分析可以准确评价的220例标本中，MRD阳性标本105例(占47.73%)，其中方案1组52例，方案2组53例。MRD阴性标本115例。MRD阳性组中位年龄35岁（1-73岁），MRD阴性组中位年龄30岁（1-72岁），见表2。

 

表2.220例患者基本信息

 

2、单个及标志物组合的贡献

 

105名阳性病例，单个标志和标志物组合的贡献见表3。

 

表3.MFC检测AML MRD中单个标志及标志物组合的贡献

 

图1.方案1示例，kaluza软件分析正常对照和正常与AML MRD阳性融合标本。a-d，为正常与AML MRD阳性融合标本，e-h为正常对照。绿色为正常CD34+髓系原始细胞，蓝色为正常CD34-CD117+髓系幼稚细胞。红色为MRD细胞。a，e为CD33/CD13/CD34/CD117/HLA-DR/CD11b的6维雷达图，b，f为CD33/CD13/CD34/CD117/HLA-DR/CD11b/CD45的7维雷达图，c，g为CD33/CD13/CD34/CD117/HLA-DR/CD11b/CD45/CD96的8维雷达图，d，h为CD34/CD117/CD7/CD56/CD19/CD38的6维雷达图。

 

3、高维分析结果：利用flowjo软件做高维分析，并结合二维图示综合分析，AML MRD检测灵敏度可达95%。但是缺点为需要正常标本做正常细胞发育图片的参照，并且受到仪器影响较大，而flowjo软件需要分析时间延长。

 

图2.方案1flow软件分析。a-c为管1，d-f为管2。a，d为AML MRD阳性病例，b，e为正常对照，c，f为MRD与正常对照融合数据。

 

 

虽然2021 ELN AML MRD的专家共识可以提供基本方案参考，但是做二维点图时需要灵活使用，增加标志、组合和识别异常方式，并结合多维软件，可以有效提高MRD细胞的识别效率。

 

 

MFC检测MRD最大的优势是快速实用、性价比高、覆盖率广，对于化疗和异基因移植都有很强的预后意义。目前临床普遍使用的3激光8到10色机型可以达到灵敏度10-3～10-4甚至10-5，覆盖率90%。然而，它也存在一些瓶颈问题，例如易受到标本质量、肿瘤细胞免疫表型与正常髓系原始细胞的差异度、抗原表达随着治疗改变、克隆性造血、药物治疗、感染、再生骨髓、人员经验等多种因素的影响，在AML检测中尤其明显。因此，设计一个高效实用的方案，并在此基础上增加分析维度，甚至进一步发展为人工智能，并结合肿瘤干细胞、免疫微环境，做综合评估，可能是MFC检测AML MRD的未来发展方向。

 

我们的研究提供了一个临床实用的高效检测方案，以及相应的软件分析方法，希望能够有助于广大同行的检测工作。